产品货号：
SN0057
中文名称：
RNase抑制剂
英文名称：
RNase Inhibitor
产品规格：
2kU|10kU
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品特点：
适用范围：
本制品可在任何可能存在RNase干扰的应用中使用，以保护RNA不被降解，如：
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
单位定义：
注意事项：
使用方法：
以下使用方法均为举例说明，具体操作请参照实际实验方法。
相关搜索：RNase抑制剂，鼠源RNase抑制剂，重组RNase抑制剂，RNase Inhibitor
本制品是在大肠杆菌中表达纯化的重组鼠源RNase抑制剂，通过1:1的比例与RNA酶非共价结合从而抑制RNase的活性，保护RNA不被降解。本制品是基于热稳定性的RNase抑制剂，在50～55℃亦能抑制RNase的活性。经过RT-PCR检验，本制品与各种商业化的逆转录酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶兼容。此外，与人源RNase抑制剂相比，本制品具有更高的抗氧化活性，更加适合于对高DTT敏感的实验(如qPCR)。
产品特点：
- 热稳定性：在50～55℃亦能抑制RNase的活性。
- 高抗氧化活性。
适用范围：
本制品可在任何可能存在RNase干扰的应用中使用，以保护RNA不被降解，如：
- cDNA第一链合成，RT-PCR（PCR及qPCR系统中均可使用）。
- 在体外转录/翻译（如病毒体外复制体系）中对RNA进行保护。
- 在RNA分离纯化过程中抑制RNase的活性。
- RNase保护实验。
本制品不会在RNA的制备或分析应用过程中对其它常用酶造成干扰。
产品组成：
| 组分 | 2kU | 10kU |
| RNase抑制剂((40U/μL) | 50μL | 250μL |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存：-20℃，有效期1年。
单位定义：
一个活力单位定义为抑制5ng RNase A 50%活力所需要的RNase抑制剂的量。活力检测的方法是测定其对RNase A水解2',3'-环单磷酸胞嘧啶的抑制作用。
注意事项：
- 本制品在广泛的pH值范围内有活性(pH5.5～9)。
- 本制品活性温度为25～55℃，在65℃以上失活。
- 冻存产品可能出现浓度梯度，使用前请将本制品充分混合。
- 由于RNase能在变性条件下保持活性，因此应注意避免使已经和RNase形成复合物的RNase抑制剂变性。不建议用于含有高浓度的尿素等变性剂的反应体系。
- 起泡或剧烈搅拌会引起RNase抑制剂失活。
- 本制品能够有效抑制RNase A、B、C活性，不抑制RNase H及RNase T1活性。
使用方法：
以下使用方法均为举例说明，具体操作请参照实际实验方法。
- RT-PCR实验
- 在RNase-Free离心管中于冰上配制如下反应液：
成分 用量 RNase抑制剂(40U/μL) 1μL RNA模板 50ng～1μg 逆转录引物 1.0μL M-MLV III反转录酶(200U/μL) 1.0μL 5×M-MLV III Buffer 4.0μL dNTP Mix(10mM Each) 1.0μL DTT(100mM) 1.0μL 无核酸酶水 至20μL - 模板：推荐使用试剂盒提取的已去除DNA的高质量RNA作为模板。
- Oligo(dT)20建议终浓度2.5μM，随机引物建议终浓度2.5ng/μL，基因特异性引物建议终浓度0.25μM。
- 模板：推荐使用试剂盒提取的已去除DNA的高质量RNA作为模板。
- 用移液器轻轻吹打混匀，瞬时离心后按下列程序进行反应：
温度 时间 25℃ 10min 50℃ 30min 85℃ 5min - 若使用随机引物，则进行该步骤；若使用Oligo(dT)20或基因特异性引物，则不进行该步骤。
- 若目的cDNA<3kb，50℃温育时间可缩短为15min。
- 若使用随机引物，则进行该步骤；若使用Oligo(dT)20或基因特异性引物，则不进行该步骤。
- 反应结束后产物立即置于冰上，-20℃或-80℃保存。
- 在RNase-Free离心管中于冰上配制如下反应液：
- 体外转录实验（未标记的RNA）
- 在下面标准的体外转录反应中，RNase抑制剂的终浓度是1U/μL。通过适当调整，这个反应可用在多种体外转录实验中。
成分 用量 RNase抑制剂(40U/μL) 2.5μL RNA聚合酶(如SP6、T3或T7) 0～50U 5×转录缓冲液 20μL 溶于水或TE中的线性化质粒DNA(2～5μg) 2μL NTP(2.5mM Each) 20μL DTT(100mM) 10μL 无核酸酶水 至100μL - 用移液器轻轻吹打混匀，瞬时离心后，37～40℃反应60～120min。
- 在下面标准的体外转录反应中，RNase抑制剂的终浓度是1U/μL。通过适当调整，这个反应可用在多种体外转录实验中。
- 体外转录实验（32P标记的RNA探针）
- 在RNase-Free离心管中于冰上配制如下反应液：
成分 用量 RNase抑制剂(40U/μL) 0.5μL RNA聚合酶(如SP6、T3或T7) 1μL 5×转录缓冲液 4μL 溶于水或TE中的线性化质粒DNA (0.2～1.0mg/mL) 1μL ATP、GTP和UTP(2.5mM Each) 4μL CTP(100μM) 2.4μL [α-32P]CTP(50μCi,10mCi/mL) 5μL DTT(100mM) 2μL 无核酸酶水 至20μL - 用移液器轻轻吹打混匀，瞬时离心后，37～40℃反应60min。
- 在RNase-Free离心管中于冰上配制如下反应液：
- 体外翻译实验
在标准和偶联的体外翻译系统中加入RNase抑制剂以保护RNA底物。
示例1：使用兔网织红细胞裂解物进行体外翻译反应。- 在RNase-Free离心管中冰上配制如下反应液：
成分 用量 RNase抑制剂(40U/μL) 1μL Rabbit Reticulocyte Lysate 35μL Amino Acid Mixture Minus Methionine(1mM) 1μL [35S]methionine(1200Ci/mmol),10mCi/mL 4μL 溶于水的RNA模板 2μg 无核酸酶水 至50μL - 用移液器轻轻吹打混匀，瞬时离心后，30℃反应60min。
- 在RNase-Free离心管中冰上配制如下反应液：
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